Neue single-cell pränatale Blut-Tests können genetische Anomalien zu identifizieren

Neue single-cell pränatale Blut-Tests können genetische Anomalien zu identifizieren

Nicht-invasive pränatale tests (NIPTs) sind für die fetale genetische Krankheit screening bei schwangeren Frauen. Im Gegensatz dazu, invasive tests wie Amniozentese tragen das Risiko einer Schädigung des Fötus. Ein Bericht in Der Journal of Molecular Diagnostics beschreibt die Entwicklung eines single-cell-DNA-assessment-Methode mit hoher Sensitivität und Spezifität. Diese nicht-invasive test ermöglicht die direkte Gewinnung von genetischen Informationen aus dem live-fetalen Zellen für die gleichzeitige Auswertung, wodurch die Wahrscheinlichkeit der Erkennung einer fetalen Anomalie.

Gegründet NIPTs haben wichtige Einschränkungen einschließlich noninformative Ergebnisse. Daher, neuartige Methoden für die nicht-invasive definitive Diagnose des fetalen genetischen Veränderungen nötig sind. Mit einem modifizierten single-cell-based-Tröpfchen-digital PCR (sc-ddPCR) NIPT, Forscher führten eine proof-of-concept-Studie, die erfolgreich bewertet die genetischen Informationen des extrem seltenen fetalen Zellen im mütterlichen peripheren Blut. Diese modifizierten sc-ddPCR-system macht es möglich, direkt zu beurteilen, Einzel-Zelle DNA-Informationen von lebenden Zellen ohne Zell-Fixierung -, Zell-Färbung und whole genome Amplifikation Schritte.

„Weil NIPTs derzeit analysieren kleine DNA-Fragmente, es kann schwierig sein, zu ermitteln, ob die Herkunft der einzelnen DNA-fragment ist die Mutter oder Ihr Fötus“, erklärte der Studienleiter Kenichiro Hata, MD, Ph. D., Chairman of Maternal-Fetal Biologie an der Nationalen Institut für Kindergesundheit und-Entwicklung, Tokyo, Japan. „Wir haben beobachtet, dass in einigen Fällen NIPT-Ergebnisse uneinig sind mit den fetalen genetischen Informationen, die gemeldet wurde. Diese Studie dient als proof-of-concept für die nicht-invasive pränatale Diagnostik mit zirkulierenden fetalen Zellen ohne strenge zellreinigung.“

Mit dieser modifizierten Technik, die bis zu 3.000 Zellen pro well können verkapselt werden, die in jedem Tropfen und gleichzeitig analysiert. Die original-sc-ddPCR-system gleichzeitig bewertet die Einzel-Zelle genetische Informationen mit hoher Sensitivität und Spezifität. Aber das ursprüngliche system ist nur nützlich für die Zell-Suspensionen mit einem klaren hintergrund (d.h., gewaschen Zelllinien werden oder eindeutig auf die sortierten Zellen mit Fluoreszenz-aktivierte zellsortierung). Die Forscher modifizierten das sc-ddPCR-system zur Verbesserung der PCR-Bedingungen in jedem Tröpfchen mit höherer Sensitivität und Spezifität, die es möglich macht, jetzt bewerten, Einzel-Zelle genetische Informationen von grob gereinigt kernhaltigen Zelle Proben mit Verunreinigungen.

Bestätigen Sie die Empfindlichkeit des modifizierten sc-ddPCR-system, Ermittler erkannt, die genomische DNA des zirkulierenden männliche fetale Zellen in einem grob sortiert Zellsuspension bei der Einzel-Zell-Ebene abgeleitet aus peripheren Blutproben von Müttern mit männlichen Föten.

Die Ermittler suchten die Präsenz der sex-bestimmende region Y-gen (SRY), die verantwortlich ist für die initiation der männlichen Geschlechtsbestimmung. Analyse von 13 Blutproben zeigten, dass nur die zirkulierende fetale Zellen aus den drei schwangeren Frauen mit männlichen Föten positiv getestet für das SRY-gen, im Gegensatz zu Zellen von den 10 schwangeren Frauen mit weiblichen Föten. Dies zeigt, dass die modifizierten sc-ddPCR-system hat nicht nur eine hohe Empfindlichkeit, aber auch eine hohe Spezifität.